Используются ДНК-полимераза, праймер для начала синтеза новых цепочек ДНК, обычные нуклеотиды и нуклеотиды, с химической структурой, не позволяющей достраивать цепь после их вставки (дидезоксинуклеотиды, или терминирующие нуклеотиды), которые содержат радиоактивную или флуоресцентную метку для детекции продукта. В других вариантах методики метку могут нести обычные нуклеотиды или праймер.
В четырех разных пробирках анализируемая матрица участвует в реакции синтеза ДНК. В каждой пробирке содержится один из четырех терминирующих нуклеотидов. При включении терминирующих нуклеотидов в ДНК синтез обрывается. В каждой пробирке получается смесь фрагментов разной длины: в одной все фрагменты с окончанием на А, в другой — на Т, и т.д.
Смесь разделяют методом электрофореза и таким образом определяют порядок нуклеотидов в анализируемой ДНК.
Секвенирование по Сэнгеру остается «золотым стандартом», оно дает самые точные результаты. Однако с помощью этого метода можно прочитать последовательность длиной лишь до 1 кб нуклеотидов, поэтому он применяется для небольших фрагментов ДНК.
Секвенирование по Сэнгеру используют для:
Анализа мутаций и полиморфизмов
Таксономического определения
Анализа микросателлитов
Валидации результатов других методов секвенирования.
Сейчас разделение фрагментов ДНК происходит в специальных капиллярных секвенаторах при помощи капиллярного электрофореза.
Мы используем файлы cookies на этом сайте, нажимая «Принять», Вы соглашаетесь с Политикой их использования
